Úvod do metody anti-kryogenní virové konzervace

Mnoho mikroorganismů musí být konzervováno nízkou teplotou, takže metoda konzervace ultra-nízkou teplotou představuje širokou škálu metod mikrobiální konzervace. Mikrobiomy, které vyžadují komplexní živiny, jako jsou ty, které nelze udržet aktivní jinými způsoby skladování (např. rostlinné patogenní houby), lze obvykle skladovat při ultra-nízkých teplotách (ATCC1983; Halliday, Baker 1985).

Tato metoda spočívá v zmrazení buněk v malých zkumavkách nebo ampulích při nižší rychlosti zmrazování (1 c/min) až na -150 stupňů C a následném uložení těchto malých zkumavek v kapalném dusíku při teplotě - 150 až 196 stupňů C. Kryoprotektivní činidla při ultranízké teplotě se liší od prostředků používaných při lyofilizaci. ATCC obvykle používá směs vyrobenou z glycerinu (10 %), metforminu (5 %) a kultivační tekutiny k uchování většiny buněčných linií. Tyto chemikálie vstupují do buňky, aby se zabránilo poškození výstelky zmrazením. S buňkami uloženými v kryogenních nádobách je třeba při resuscitaci zacházet opatrně. Když se trubice zahřeje, výsledný ledový krystal zabíjí buňky a nehodě lze předejít správným provozem.

Dokud se vzorek rychle rozmrazí, aby se snížila ztráta vitality, praxe je taková: zapečetěná malá zkumavka se rychle vloží do vody o teplotě 37 stupňů C, dokud veškerý led neroztaje, a pak se zkumavka otevře s obsahem do média. Mikroby, které jsou udržovány při extrémně-nízkých teplotách, musí být vždy skladovány v prostředí s velmi nízkou teplotou, takže jsou potřeba nádrže na tekutý dusík. Pravidelnou pozornost je třeba věnovat rehydrataci kapalného dusíku při dlouhodobém-skladování. Tento typ skladování vyžaduje více finančních prostředků než lyofilizace-, včetně práce a kapalného dusíku, které jsou nezbytné k udržení skladovacích teplot.